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液氮冷凍研磨機提取RNA步驟探討

      液氮冷凍研磨機采用電磁撞子研磨技術,將裝有樣品的密閉容器浸入液氮,在超低溫環境下,利用電磁驅動鋼制撞子往復撞擊樣品,快速徹底地粉碎樣品。獨特的研磨方式相比傳統研磨,研磨時間更短,研磨樣品更為精細。
      液氮冷凍研磨機的設計人性化、安全高效、耐用、操作簡單、準確性和重現性好、避免樣品間的交叉污染,適應不同客戶的各種需求,是公認的“研磨手段”,廣泛應用于生物化學、動植物、醫學、礦物學、材料科學等領域。
液氮冷凍研磨提取RNA該如何進行?一起來看看:
1.用75%酒精對實驗操作臺、移液槍、槍頭盒、管架進行消毒。
2.取出-80℃冰箱保存的組織塊,放于用液氮預冷過的研缽中,敲碎一小塊組織,其余放回凍存管。
3.加入液氮,先輕輕敲碎組織到最小塊,再研磨成粉末,直到看不到組織塊。
4.加入液氮使粉末凝聚成團,馬上用藥勺把粉末轉移到2.0ml EP管中。
5.待液氮揮發干后,加入1ml Trizol裂解液,用1ml移液器將細胞吹散開,保證細胞裂解充分,必要時可借助水平振蕩器混勻。
6.4℃離心機12000rpm離心5分鐘,棄沉淀。
7.加入CHCl3,比例200ul CHCl3/ml Trizol,顛倒混勻,室溫放置15分鐘。
8.于4℃離心機12000g離心15分鐘。取上清液,注意吸取上清是無觸碰到中間層或下層。
9.取上清液,注意吸取上清是無觸碰到中間層或下層。
10.加入等體積異丙醇,-20℃沉淀1小時。
11.于4℃離心機12000g離心10分鐘。
12.棄上清,加入1ml 75%酒精漂洗沉淀,于4℃離心機800g離心5分鐘。必要時可重復酒精洗滌。
13.棄上清,可選擇再次離心去除殘留的乙醇,沉淀在安全柜內晾干,切忌過干,只需目測乙醇揮發干即可。
14.根據沉淀的大小,使用無RNA酶的水將RNA沉淀充分溶解。選擇溶解沉淀的體積,一般為30-100ul。測RNA濃度,此方法RNA A260/A280值在1.6-1.8之間。
15.電泳檢測RNA完整性,0.5XTBE Buffer,110V電泳30分鐘。
16.最后將沉淀保存在-80℃低溫冰箱。

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